ePathology.ro

• Reprezinta combinatia dintre 2 stiinte : imunologia si histochimia, avind ca scop evidentierea proprietatilor antigenice ale unor substante intr-un tesut, utilizind anticorpi monoclonali sau seruri polireactive.
• Vizualizarea substantelor antigenice se poate face atit la nivel tisular, cit si la nivel celular si subcelular, pe preparate la gheata sau parafina.

Tehnica IHC - principiul metodei

• Se lucreaza cu anticorpi monoclonali, de care sunt legate una sau mai multe molecule enzimatice, ce catalizeaza transformarea unui substrat incolor intr-un produs de reactie colorat. Enzima este cuplata covalent cu portiunea Fc a anticorpului; pe ea se plaseaza substratul cromogenic.
• Enzimele utilizate sunt :
  • peroxidaza
  • fosfataza alcalina  
• Substratele folosite sunt :
  • DAB (brun) sau AEC (rosu) pentru peroxidaza
  • “fast red” si “fast blue” pentru fosfataza alcalina

Metoda ABC:
(dupa Hsu et al., 1981, modificata de G. Bussolatti & P. Gugliotta, 1983)

• In prima etapa, Ac primar se cupleaza cu Ag dorit; in a doua etapa de Ac primar se leaga un Ac secundar, marcat cu biotina
• In a treia etapa, se introduce un reactiv cu mai multe molecule de avidina marcata cu peroxidaza
• La locusul antigenic se leaga un complex cu multe molecule de peroxidaza, intensitatea reactiei cromogene va fi accentuata si sensibilitatea metodei mare

Metoda dextranului (DAKO EnVisionTM Systems, 1996)

• Permite cuplarea unui mare numar de molecule enzimatice pe un schelet polimeric de dextran hidrosolubil; cu acest complex se pot cupla Ac secundari
• Se obtine astfel un reactiv care poate fi utilizat in cadrul unei tehnici in 2 timpi, care aduce o mare cantitate de enzime la locul reactiei si va creste foarte mult sensi-bilitatea detectarii Ag dorit

Principalele aplicatii ale tehnicilor IHC in practica de rutina

1) Clasificarea histogenetica a tumorilor slab diferentiate sau anaplazice
2) Diagnosticul pozitiv al bolilor leucocitare
3) Tipizarea tumorilor neleucocitare
4) Detectia antigenelor virale si microbiene
5) Evidentierea markerilor de prognostic in cancer
6) Stabilirea susceptibilitatii de raspuns la tratament a unor tumori

Impactul IHC in diagnosticul anatomo-patologic

• Diagnosticul pozitiv si diferential in tumori solide si nesolide
• Deteminarea factorilor de prognostic in cancer :
  • Microinvazia si pseudoinfiltratia
  • Micrometastazele oculte
  • Factori de proliferare
  • Proto-oncogene si anti-oncogene
  • Factori de crestere